Keul-o-test

Zona-Pellucida-Antikörper-Latex

Agglutinations-Test

Bestell-Nr.: BS-20-1 0
Anzahl: 50 Bestimmungen

Agglutinationstest zur Bestimmung von Antikörpern gegen Zona Pellucida in
humanem Serum, Zervikalmucus, Uterussekret und Fruchtwasser

- Nur zur in-vitro-Diagnostik -

C .: EU Registrierungs-Nr.: DE/CA80/IVD1705

Zertifiziertes Qualitatsmanagementsystem gemäß

DIN EN ISO 13485

DIN EN ISO 9001:2000

Verwendungszweck

Der Zona-Pellucida-Antikörper-Latex-Agglutinationstest von BIOSERV Diagnostics ist ein schneller, zuverlässiger und semiquantitativer Test zum Nachweis von Antikörpern gegen Zona Pellucida in humanem Serum, Zervikalmucus, Uterussekret und Fruchtwasser.

Klinische Relevanz

Antikörper, die gegen Zona-Pellucida-Antigene gerichtet sind, können Unfruchtbarkeit bei Frauen verursachen.

Anwendungsgebiete

Der Zona-Pellucida-Antikörper-Latex-Agglutinationstest von BIOSERV Diagnostics dient in der klinischen Praxis zur Diagnose immunologisch bedingter Infertilität bei Frauen.

Testprinzip

Durch spezifische gegen Zona-Pellucida-Antigene gerichtete Antikörper im Untersuchungsmaterial agglutinieren antigen-beschichtete Latexpartikel im Verlauf von 1-2 Minuten, sofern Zona-Pellucida-Antikörper vorhanden sind. Der Test erfolgt auf einem mitgelieferten speziellen Objektträger, ist einfach durchführbar und als Suchtest geeignet.

Bestandteile des Kits

(ausreichend fur 50 Bestimmungen)

Erforderliche Geräte und Materialien, die nicht im Kit enthalten sind

• Röhrchen fur die Verdünnung der Proben.
• Mikroliterpipetten mit auswechselbaren Spitzen: 10µl, 20 µl, 100µl und 500µl.
• Destilliertes oder deionisiertes Wasser.
• Bitte verwenden Sie nur kalibrierte Pipetten und Geräte.

Warnungen und Hinweise

• Dieser Testkit ist nur zur in-vitro-Diagnostik bestimmt.
• Pipettieren Sie niemals mit dem Mund.
• Bitte betrachten Sie alle Proben als potenziell infektiös, und bearbeiten Sie sie nur mit äußerster Sorgfalt.
• Der Umgang und die Entsorgung sollen entsprechend den nationalen Sicherheitsrichtlinien erfolgen.

Hinweise zur Vorbereitung der Testbestandteile

• Die Bestandteile dieses Kits bilden eine integrale Einheit und dürfen daher nicht mit den Bestandteilen anderer Kits gemischt werden.
• Bringen Sie alle Reagenzien und Proben vor Gebrauch auf Raumtemperatur.
• Durchmischen Sie alle Reagenzien gründlich und ohne Schaumbildung.
• Wenn die Testdurchführung einmal begonnen wurde, muss sie ohne Unterbrechung zu Ende geführt werden.
• Bitte verwenden Sie fur jede Probe neue Pipettenspitzen.
• Die optimale Labortemperatur liegt bei 20 - 22 °C.

Hinweise zu Lagerung und Haltbarkeit

• Lagern Sie die Reagenzien bei 2 - 8° C.
• Die Reagenzien sind haltbar bis zum Ablauf des Haltbarkeitsdatums des Kits.
• Verschließen Sie die Fläschchen unmittelbar nach dem Gebrauch.

Probenmaterial

Serum, Zervikalmucus, Uterussekret und Fruchtwasser

Probenentnahme und Vorbereitung

Serum:

Entnehmen Sie Blut durch Venenpunktion und separieren Sie das Serum nach der Gerinnung durch Zentrifugieren bei Raumtemperatur. Vermeiden Sie eine Hämolyse. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen. Bewahren Sie die Röhrchen verschlossen auf, da die Lösungen sonst ihre Konzentration verändern können und ein Kontaminationsrisiko besteht.

Bearbeiten Sie alle Proben mit äußerster Sorgfalt und betrachten Sie sie grundsätzlich als potenziell infektios.

• Es sind keine Interferenzen mit extrinsischen Faktoren oder anderen Substanzen bekannt.
• Die Proben können bei verschiedenen Temperaturen für folgende Zeitspannen aufbewahrt werden:

Umgebungstemperatur (bis zu 30° C): bis zu drei Tagen

Kühlschranktemperatur (2 - 8° C): bis zu einer Woche

Haushaltsgefrierschranktemperatur (-10° C - -20° C): bis zu einem Jahr

Vorsichtsmaßnahmen:

Untersuchungsmaterial von Patienten, wie es fur Laboratoriumsuntersuchungen eingesetzt wird, ist stets als potenziell infektiös einzustufen und entsprechend zu behandeln. Proben von Risikopatienten sollten stets gekennzeichnet und unter geeigneten Sicherheitsvorkehrungen bearbeitet werden. Darüber hinaus sind die jeweils geltenden Vorschriften zur Unfallverhütung, zum Umweltschutz und zum Umgang mit Gefahrstoffen einzuhalten. Insbesondere mussen stets geeignete Schutzkleidung und Schutzhandschuhe getragen werden

ACHTUNG! Es sind keine Testsysteme erhältlich, die garantieren können, dass die Reagenzien dieses Kits absolut frei sind von Hepatitis-B-Viren, Human Immunodeficiency Virus (HIV) oder anderen Krankheitserregern. Ale menschlichen Patientenproben sind grundsätzlich als potenziell infektios zu betrachten.

Testdurchfuhrung fur Zervikalmucus, Uterussekret und Fruchtwasser

• Vorbereitung des Verdünnungspuffers: Verdünnen Sie den konzentrierten Verdünnungspuffer (30 ml) mit 60 ml Aqua dest.. Die Verdünnung ist bei 2 - 8° C für vier Wochen haltbar.
• Verdünnen Sie unmittelbar vor der Testdurchfuhrung die Proben mit dem Verdünnungspuffer im Verhaltnis 1:50 (1+49), mischen Sie diese gründlich und zentrifugieren Sie sie anschließend etwa 10 Minuten bei 1000 g.
• Stellen Sie mit dem Überstand eine Verdünnungsreihe im log 2 her (1:100; 1:200; 1:400; 1:800).
• Verwenden Sie die positive und negative Kontrolle jeweils unverdünnt.
• Resuspendieren Sie die Antigensuspension durch mindestens 1-minutiges intensives Durchmischen, z. B. mit Hilfe eines Vortex-Mischers.
• Pipettieren Sie 10µl der Antigensuspension innerhalb des kreisförmig markierten Feldes auf den Objektträger. Pipettieren Sie anschließend 20µl der Kontrollen und der verdünnten Untersuchungsproben (1:100; 1:200; 1:400; 1:800) zu jeder Antigensuspension in die Objektträgerkreise.
• Vermischen Sie die Antigensuspension und die Proben bzw. Kontrollen mit Hilfe der Rührstäbchen innerhalb derjeweiligen Kreise gründlich.
• Bewegen Sie den Objekttrager danach langsam in kreisformiger Bewegung per Hand.
• Betrachten Sie den Objekttrager unter weiterer Bewegung nach ca. 2 Minuten eingehend in Hinsicht auf eine Agglutination.

Bitte beachten Sie, dass in Seminalplasma eine Agglutination in Hinsicht auf das Vorhandensein von Anti-Zona-Pellucida- Antikörpern nur in Probenverdünnungen von 1:100 und mehr als positiv bewertet wird. Titrieren Sie daher beim Auftreten von positiven Reaktionen soweit, bis keine Agglutination mehr erfolgt.

Testdurchfuhrung für Serum

• Vorbereitung des Verdünnungspuffers: Verdunnen Sie den konzentrierten Verdünnungspuffer (30 ml) mit 60 ml Aqua dest. Die Verdünnung ist bei 2 -8° C vier Wochen haltbar.
• Verdünnen Sie die Proben mit Verdünnungspuffer im Verhaltnis 1:200 (z.B. 5µl Serum + 995µl Verdünnungspuffer).
• Stellen Sie eine Verdünnungsreihe im Verhältnis 1:2 her - 1:400, 1:800, 1:1600.
• Verwenden Sie die positive und die negative Kontrolle jeweils unverdünnt.
• Resuspendieren Sie die Antigensuspension durch mindestens 1-minütiges intensives Durchmischen, z. B. mit Hilfe eines Vortex-Mischers.
• Pipettieren Sie 10µl der Antigensuspension innerhalb des kreisformig markierten Feldes auf den Objektträger. Pipettieren Sie anschließend 20µl der Kontrollen und der verdünnten Untersuchungsproben (1:200; 1:400; 1:800; 1:1600).
• Vermischen Sie die Antigensuspension und die Proben bzw. Kontrollen mit Hilfe der Rührstabchen innerhalb derjeweiligen Kreise gründlich.
• Bewegen Sie den Objektträger danach langsam in kreisformiger Bewegung per Hand.
• Betrachten Sie den Objektträger unter weiterer Bewegung nach ca. 2 Minuten eingehend in Hinsicht auf eine Agglutination.

Bitte beachten Sie, dass in Serum eine Agglutination in Hinsicht auf das Vorhandensein von Anti-Zona-Pellucida- Antikörpern nur in Probenverdünnungen von 1:200 und mehr als positiv bewertet wird. Titrieren Sie daher beim Auftreten von positiven Reaktionen solange, bis keine Agglutination mehr erfolgt.

Bewertung der Ergebnisse

Die Auswertung erfolgt visuell nach 2-3 Minuten und sollte nach insgesamt 4-5 Minuten abgeschlossen sein, da sonst durch Eintrocknung Artefakte entstehen konnen.

• Positive Reaktion: Eine klar sichtbare Agglutination des Reaktionsgemisches nach 1-2 Minuten, gekennzeichnet durch feinkörnige oder grobe Granulation der Suspension. Wegen möglicher unspezifischer Reaktionen ist erst eine Agglutination mit der ersten Verdünnungsstufe (1:100 bei Zervikalmucus bzw. 1:200 bei Serum) und höher verdünnten Proben als positiv zu werten!

Fur Serum ist eine positive Reaktion der 1:200-Verdünnung equivalent zu 60 Einheiten im ELISA -Test

• Neqative Reaktion: Das Ergebnis wird als negativ bewertet, wenn keine eindeutige Agglutination erkennbar ist. Das Reaktionsgemisch erscheint homogen und milchig.

Da Antikörpertiter individuellen Schwankungen unterliegen, hat eine Einzelbestimmung nur beschränkten Aussagewert. Der Test sollte daher mindestens drei Mal innerhalb von 8-12 Wochen wiederholt werden, bevor eine immunologische Subfertilität angenommen wird.

Beschränkungen des Testes

Bei Temperaturen, die hoher als 30° C liegen, sollten die Proben gekühlt oder gefroren transportiert werden. Schwer hämolytische oder lipämische Seren oder Seren von Patienten mit Leberkrankheiten sollten nicht verwendet werden. Auch durch andere Erkrankungen wie etwa poly- oder monoklonale Gammapathien, Autoimmunerkrankungen oder durch einen veranderten Immunstatus können die Ergebnisse beeintrachtigt werden.

Hersteller:

Von-Langen-Weg 10 D-48565 Steinfurt Tel.: 02551/4090  Fax.: 02551/1298 Web: www.biogentechnologies.de